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小鼠成纤维细胞传代流程的注意事项

发表时间:2022-06-27  |  点击率:571
  小鼠成纤维细胞分离自小鼠皮肤组织的贴壁细胞,成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymalcell)分化而来。功能活跃的细胞称为成纤维细胞。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。纤维细胞(fibrocyte),结缔组织中数目最多的细胞,相对静止的细胞称纤维细胞。成纤维细胞数目最多,胞体大,为多突的纺锤形或星形的扁平细胞,细胞核呈规则的卵圆形,细胞轮廓不清,具有突起。其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。纤维细胞较小,呈多角形,胞质较少,弱嗜酸性,胞核亦较小,染色较深,电镜下粗面内质网较少,高尔基复合体不发达。
  小鼠成纤维细胞传代流程:
  1.吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加1~2ml0.25%EDTA的胰酶消化(注意把握消化时间,通常控制在1~2min)。
  2.镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁运动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落、吹散。
  3.取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,于培养箱中培养。
  4.注意培养基PH值变化情况,定期换液,待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。
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