人膀胱癌细胞的培养

　　人膀胱癌细胞的培养通常遵循以下步骤和条件：
 

　　一、培养条件
 

　　培养基：常用RPMI-1640或DMEM等培养基，并添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的双抗(青霉素/链霉素)以提供必要的营养和防止污染。
 

　　培养环境：细胞需在37℃、5% CO2及饱和湿度的培养箱中培养。
 

　　二、培养步骤
 

　　复苏：
 

　　将冻存的细胞从液氮中取出，迅速置于37℃水浴中摇晃解冻。
 

　　解冻后，将细胞悬液转移至含有适量培养基的离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清液。
 

　　用新鲜培养基重悬细胞，接种至培养瓶中，置于培养箱中培养过夜。
 

　　第二天换液并检查细胞密度。
 

　　传代：
 

　　当细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代。
 

　　弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1~2次。
 

　　加入适量的胰蛋白酶消化液(如0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)，置于37℃培养箱中消化1~2分钟。
 

　　在显微镜下观察细胞消化情况，待细胞大部分变圆并脱落后，加入培养基终止消化。
 

　　轻轻吹打细胞，使其脱落，并转移至离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清液。
 

　　用新鲜培养基重悬细胞，按1:2到1:5的比例分到新的培养瓶或培养皿中，补足培养基，置于培养箱中继续培养。
 

　　冻存：
 

　　待细胞生长状态良好时，可进行冻存。
 

　　弃去旧培养基，用PBS润洗细胞后，加入胰蛋白酶消化液消化细胞。
 

　　消化完成后，加入培养基终止消化，并轻轻吹打细胞使其脱落。
 

　　将细胞悬液转移至离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清液。
 

　　用冻存液(如90%FBS+10%DMSO)重悬细胞，并调整细胞密度至适宜范围。
 

　　将细胞悬液分装至冻存管中，每管1ml左右，并标注好细胞名称、代数、日期等信息。
 

　　将冻存管置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱过夜，然后转入液氮中长期保存。
 

　　三、注意事项
 

　　无菌操作：整个培养过程中需严格遵循无菌操作原则，防止细胞污染。
 

　　消化时间：消化时间需根据细胞类型和胰蛋白酶活性进行调整，避免消化过度导致细胞损伤。
 

　　换液周期：一般每2~3天换一次液，以保持培养基的新鲜和营养充足。
 

　　细胞状态观察：定期观察细胞生长状态，包括细胞形态、密度、生长速度等，以便及时调整培养条件。