肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)位于肺血管中膜，其收缩与舒张直接调控肺血管阻力和右心室后负荷。在低氧、炎症因子或血管活性物质刺激下，PASMCs可发生过度增殖、凋亡抵抗及表型转化（从收缩型向合成型转变），这是肺动脉高压(PAH)的核心病理特征。大鼠肺动脉平滑肌细胞因其血管尺寸适中（主肺动脉直径约2-3mm）、细胞量充足，且大鼠对低氧性肺动脉高压高度敏感，是心血管和呼吸生理学研究中使用广泛的PASMC来源。 分离通常采用组织块贴壁法或酶消化法。取雄性SD大鼠（200-250g），过量麻醉后迅速开胸取出心脏与肺，在解剖显微镜下仔细剥去外膜脂肪和结缔组织，沿纵轴剪开肺动脉，用无菌镊子轻轻刮除内膜内皮细胞，再将血管中膜剪成1-2mm³小块。采用组织块法时，将小块均匀贴于培养瓶底面，加入少量含20%胎牛血清的DMEM低糖培养基，倒置培养4-6小时使组织块贴牢，再翻转加入培养基，静置培养约7-10天，可见细胞从组织块边缘爬出。酶消化法则用0.2%I型胶原酶+0.1%弹性蛋白酶消化中膜组织2小时，过滤离心后直接接种。PASMCs呈典型的“峰-谷”生长，形态为长梭形，形成涡旋状排列，免疫荧光染色平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)应呈强阳性。
鉴定指标包括：α-SMA、SM22α、Calponin、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)的表达，同时通过Dil-Ac-LDL吞噬实验证实内皮细胞污染低于1%。功能实验常用：增殖实验（CCK-8或EdU掺入），观察PDGF-BB、内皮素-1或低氧对PASMCs增殖的影响；划痕或Transwell迁移实验；流式细胞术检测细胞周期与凋亡；钙成像监测激动剂引起的胞内钙浓度升高；以及胶原凝胶收缩实验评估细胞收缩功能。在应用方向上，大鼠PASMCs已广泛应用于：筛选PAH药物如ROCK抑制剂（法舒地尔）、酪氨酸激酶抑制剂；研究钾通道（Kv1.5、Kv2.1）在低氧性肺血管收缩中的调节；以及线粒体功能障碍、氧化应激与PASMC增殖的分子机制。值得注意的是，传代超过5次的PASMCs会逐渐丢失收缩表型标志物，建议早期传代（P2-P4）用于关键实验。
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更新时间：2026-05-13
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