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人胚肾细胞293T的处理要注意以下几点

发表时间:2022-07-06  |  点击率:553
  人胚肾细胞;293,上皮状,早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1~4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。生物安全级别为2级。
  人胚肾细胞293T的处理要注意以下几点:
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
  3.轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
  4.收到细胞后初次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
  3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
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