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人膜间皮细胞使用前要做好哪些工作

发表时间:2022-07-11  |  点击率:1910
  间皮细胞就是构成间皮的细胞,间皮是由一层细胞组成的,胸膜,腹膜和器官相接的面上都有间皮细胞。间皮的作用是起到润滑作用,使身体内的器官与器官、器官与胸膜或与腹膜之间能得到良好的保护,不会因为互相磨损受伤。间皮的润滑和保护作用就是靠间皮细胞所分泌的细胞外基质、玻尿酸类物质做到的,所以间皮细胞就是身体内的正常细胞。
  人膜间皮细胞使用前要做好哪些工作:
  1)冻存人膜间皮细胞的复苏:
  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL*培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,*培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml*培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
  3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
  3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
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