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小鼠成纤维细胞组织块的培养方法说明

发表时间:2022-08-23  |  点击率:680
  成纤维细胞是疏松结缔组织中最常见而且数量较多的一种细胞,位于胶原纤维近旁并依附于其上。此细胞的形态结构可随其功能状态的不同而改变。在功能活动旺盛时,成纤维细胞的胞体较大,呈扁平星形,有突起。胞核呈卵圆形,核染色质较少,着色浅,核仁明显。胞质较多,弱硷性,内含丰富的粗面内质网、核蛋白体、高尔基复合体以及微丝和微管等结构,表明此种细胞具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和多糖蛋白,形成胶原纤维、弹性纤维、网状纤维和基质的作用。在相对静止或功能活动不活跃时的细胞,称为纤维细胞。这种细胞比成纤维细胞小,轮廓不甚清楚,多呈梭形。胞质少,弱嗜酸性,其中粗面内质网、高尔基复合体及其它细胞器均不发达。这表明纤维细胞是功能活动不活跃的细胞。但在一定条件下,如创伤修复,结缔组织再生时,纤维细胞可转化为功能活跃的成纤维细胞,积极参与合成和分泌蛋白质,形成纤维和基质。简便快速分离培养成纤维细胞对是否能在体外成功建立模拟肿瘤微环境具有重要意义。
小鼠成纤维细胞组织块培养法:
  1)小鼠成纤维细胞组织块培养法在已有文献基础上优化进行。将刚出生的小鼠处死,75%酒精浸泡消毒后,放入生物安全柜内进行操作。先取其背部皮肤,放入75%酒精中浸泡消毒,以无Ca2+、Mg2+PBS漂洗皮肤。其次,将皮肤剪成1mm2大小,均匀平贴于无菌平皿中,加入适量DEME完全培养基,37℃、5%CO2培养24h,使皮肤能够牢固平贴于平皿上。24h后再加入足量的培养基37℃、5%CO2培养,1周后将组织块去除,即可见成纤维细胞生长(在这1周内除了中间换1次培养基,尽量勿动培养平皿)。此后,每2天换1次培养液,8~10d后可见细胞铺满皿底,消化传代。
  2)成纤维细胞传代
  当去组织块后的成纤维细胞在培养平皿中长成片可传代时,吸去旧培养液,用无Ca2+、Mg2+PBS漂洗1次,加入0.05%胰蛋白酶,覆盖皿底细胞,在室温下轻轻吹打。将平皿在倒置显微镜下观察,消化5min左右后,发现成纤维细胞变圆时,立即加入等体积的DEME完全培养基终止胰酶反应,用吸管轻轻吹打,吹打结束后,将细胞悬液移入离心管,1200r/min离心8min,弃上清液后加入DEME完全培养液,吹散混匀按1∶2浓度传代,以后每2~3天传代1次。
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