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人脐静脉内皮细胞的操作流程说明

发表时间:2022-11-16  |  点击率:176
    脐静脉内皮细胞是一种来源于脐带组织的干细胞,它是脐静脉的重要组成细胞之一,理论上能够进行无限的传代,所以进行细胞实验的时候,常选择人脐静脉内皮细胞。
  人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),常作为内皮细胞功能和病理学的研究模型,应用于血管生成、愈合、血管建模、组织工程、炎症、肿瘤等研究中。
  人脐静脉内皮细胞的操作流程:
  1.产科无菌取脐带1根,置于含保鲜液的广口试剂瓶中4℃保存(避免污染),在最短的时间内,将脐带携入实验室,进行以下操作。
  2.在超净工作台或无菌层流工作台上,将脐带用D-Hank溶液清洗干净,将静脉插管插入脐静脉中,并用丝线结扎、固定。
  3.用20ml注射器将37℃的D-Hanks溶液注入脐静脉,反复冲洗至清洗液无色澄清为止。
  4.用血管钳夹住脐静脉的另一端,并将0.2%的Ⅰ型或Ⅱ型胶原酶(约20ml)通过静脉插管注入脐静脉中,至脐静脉充盈为止(排掉静脉管中的空气)。
  5.将脐带放置在盛有37℃水的玻璃烧杯中,在37°C水浴条件下消化约20min(每5min抽吸/注入1次)。
  6.当酶液变成混浊时(在显微镜下可见大量游离细胞),将酶液在脐静脉中反复抽吸冲打3次后,吸出并置于50ml离心管中。
  7.细胞悬液经350g离心5min后,弃去上清液,并用D-Hanks溶液清洗2次,然后再以350g离心5min。
  8.弃去上清液,将细胞溶于8ml内皮细胞培养液(M l99 80ml、FBS 20ml、PS 1ml、L-Gln 2mM、ECGS 10mg/100ml、Heparan 4000U/1 00ml、Insulin mu/100ml)中,接种于预先包被2%明胶的T25培养瓶中。
  9.细胞培养在37℃、5%CO2培养箱中,24h后换液,弃掉未贴壁细胞。之后每2~3d换液1次,待细胞汇合时消化传代。
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