小鼠小胶质BV2的操作注意以下事项

　　小鼠小胶质BV2由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。BV-2细胞保留有小神经胶质细胞多种形态、表征和功能特征；免疫组化结果显示，BV-2细胞为MAC1、MAC2阳性；而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。

　　小鼠小胶质BV2“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细Chemicalbook胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力较好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

　　小鼠小胶质BV2的操作流程：

　　1、您收到BV2小鼠小胶质细胞后，请按照以下方法进行操作：

　　取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜培养液继续培养或进行传代。

　　2、细胞传代：

　　1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

　　2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

　　3）弃上清，沉淀细胞用12ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

　　4）待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

　　3、细胞冻存：

　　1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

　　2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

　　3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

　　4）先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

　　4、细胞复苏：

　　1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

　　2）将冻存管中的细胞移至含5ml培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

　　3）弃上清，沉淀用5ml培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

　　4）第二天，换用新鲜培养基继续培养。