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小鼠小胶质BV2的操作注意以下事项

发表时间:2022-12-18  |  点击率:151
  小鼠小胶质BV2由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。BV-2细胞保留有小神经胶质细胞多种形态、表征和功能特征;免疫组化结果显示,BV-2细胞为MAC1、MAC2阳性;而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。
  小鼠小胶质BV2“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细Chemicalbook胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力较好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
  小鼠小胶质BV2的操作流程:
  1、您收到BV2小鼠小胶质细胞后,请按照以下方法进行操作:
  取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜培养液继续培养或进行传代。
  2、细胞传代:
  1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
  3)弃上清,沉淀细胞用12ml培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
  4)待细胞贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
  3、细胞冻存:
  1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
  3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
  4)先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
  4、细胞复苏:
  1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
  2)将冻存管中的细胞移至含5ml培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
  3)弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
  4)第二天,换用新鲜培养基继续培养。
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