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小鼠单核巨噬细胞白血病细RAW264.7的培养注意事项和要点

发表时间:2022-12-16  |  点击率:297
  小鼠单核巨噬细胞白血病细RAW264.一般为圆形或椭圆形,小而透亮。因为其具有较强的吞噬能力,并在吞噬抗原后释放趋化因子,促使细胞分化出伪足,粘附攀爬能力也因此增强。若细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣就会促使细胞呈现出梭形、长梭形,镜下观察就会发现细胞形态变为梭形且面积变大,不再是具有细长伪足的类圆形小细胞。这也是出现消化困难的一个主要原因。
  小鼠单核巨噬细胞白血病细RAW264.7的培养注意事项和要点:
  1.由于RAW264.7细胞易有不同形态,传代时就会发现形态变为梭形的细胞很难消化下来,轻敲培养皿细胞不会脱落,用力吹打又容易对细胞产生较大损伤,因此要尽量避免细胞发生形态改变。即在接种细胞时保持一个适中的传代密度,避免其向终末细胞分化,因为一旦细胞发生分化变为长形是无法恢复的,这是培养RAW264.7细胞时最需要注意的问题。
  2.RAW264.7细胞喜欢连片生长,正常状态下应该是一小片一小片的分布在培养皿中,片片之间不相连接,等到长到更多更密的时才会连成大片,但同时也会叠加成层,容易出现部分细胞飘起无法贴壁的问题。所以,要关注好细胞的汇合程度,控制好细胞的生长速度,不能等到叠加成层时才去传代。
  3.RAW264.7细胞传代后贴壁时间较短,半小时左右绝大部分细胞就能够贴下去,刚贴壁时细胞呈圆形,折光度很好,镜下观察如小珍珠状一个个地散落于培养皿中。生长一段时间后,部分细胞会变成类似四角形,伸出伪足之类的。这个时候就是在提醒你注意传代了,此时无论汇合度如何都需要进行传代了,因为形态发生改变的细胞对实验结果会产生较大影响,最终造成实验数据不理想。
  4.在细胞生长的初始阶段,细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加,细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度,会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中,镜下观察会同时出现悬浮和贴壁两种形态。
  5.该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时,吸走部分培养液,留下少许培养液(例如使用T25培养瓶留下2 ml),用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落,充分吹打后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内,混匀后进行培养。
  6.该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时,细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起,有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的,在传代时应收集起来,离心后细胞沉淀可以继续培养。
  7.血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化,建议选用高质量的胎牛血清。
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