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大鼠原代乳腺上皮细胞的培养方法介绍

发表时间:2022-12-22  |  点击率:157
   大鼠原代乳腺上皮细胞分离自乳腺组织;乳腺是复管泡状皮肤腺,主要由腺上皮细胞组成,并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期,导管末梢发育成腺泡;近年来的许多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的发生都与乳腺上皮细胞(MEC)有密切联系,体外分离培养MECs即成为研究开展的关键步骤。乳腺是乳房的腺体组织,乳腺由导管和腺泡组成,腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常发育是由体内激素和局部合成的生长因子共同调控,其中乳腺表达的生长因子对乳腺上皮细胞的增殖、分化、凋亡产生极大的影响。乳腺上皮细胞分离自分娩后3-5天的乳腺组织,为贴壁生长型细胞,呈多角形、圆形以及短梭形;乳腺上皮细胞主要功能即生乳功能。
  大鼠原代乳腺上皮细胞的培养方法:
  1.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  2.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  3.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  大鼠原代乳腺上皮细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
  1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
  2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
  3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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