大鼠肺动脉平滑肌细胞培养要点

　　大鼠肺动脉平滑肌细胞是从大鼠肺动脉组织中分离出的关键结构细胞，在调控肺血管收缩与舒张功能中发挥核心作用。
 

　　大鼠肺动脉平滑肌细胞培养要点：

 

　　培养基与条件
 

　　基础培养基：DMEM/F12(1:1)或DMEM高糖型，含10%胎牛血清(FBS)、1%青霉素-链霉素双抗。
 

　　培养环境：37℃、5% CO₂、饱和湿度。
 

　　换液频率：每2-3天换液一次。
 

　　传代方法
 

　　消化液：0.25%胰蛋白酶(含EDTA)。
 

　　操作步骤：
 

　　吸弃培养基，PBS漂洗2次。
 

　　加入胰蛋白酶消化1-2分钟，镜下观察细胞收缩变圆后终止消化。
 

　　吹打形成单细胞悬液，1000rpm离心5分钟。
 

　　重悬后按1:2比例接种至新培养瓶。
 

　　纯化与鉴定
 

　　差速贴壁法：通过贴壁特性差异去除内皮细胞和成纤维细胞。
 

　　免疫荧光鉴定：传代至第2-3代时，采用α-SMA免疫荧光染色，阳性率≥90%为合格。
 

　　注意事项
 

　　无菌操作：全程在超净工作台完成，避免支原体/细菌污染。
 

　　消化时间：消化不足导致细胞释放少，过度消化损伤细胞活性，需镜下实时观察。
 

　　温度控制：PBS、消化液、培养基需预温至37℃，避免低温刺激细胞。
 

　　动物选择：优先选择幼龄大鼠(8-12周龄)，老年大鼠肺动脉组织纤维化严重，细胞活性低。