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小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的培养操作步骤

发表时间:2022-08-25  |  点击率:620
  小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1能够特异性表达成骨相关转录因子Runx-2和碱性磷酸酶等早期成骨分化表型标志物,已经被广泛应用于成骨分化的研究中。成骨细胞的来源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外组织。及人的胚胎颅骨或新生动物的颅骨为成骨细胞的常用来源。
  小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的培养操作步骤:
  1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
  2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
  3.在距离紫外灯直射范围内20-30厘米处照射2-3小时;
  4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
  5.将培养板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
  小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的注意要点:
  1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
  2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
  3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
  4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
  5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
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