关于人胚肾细胞293T的培养步骤说明

　　人胚肾细胞293T是293细胞株插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生细胞株。

　　人胚肾细胞293T的培养步骤：

　　1）培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液；

　　2）无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次（按培养体积加入）；

　　3）加入适量胰酶消化适当时间（一般胰酶为0.25%；9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑，一般如果是细胞株，非原代培养，消化1－2分钟足矣）；

　　4）用枪头吹打数十次（视细胞类型而定。一般细胞株30－50次吧，耗时一般2分钟左右）；

　　5）加入适量体积*培养基终止胰酶消化（如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，可以加入1mL*培养基；现在培养瓶（皿）里有2mL溶液）。

　　6）现在可以将溶液进行分瓶（2mL）。如果是细胞株，直接均分到两个培养瓶（皿）里。如果是原代培养，可以根据消化时间来对细胞进行分离；因此可以将溶液（2mL）都转入新的培养瓶（皿）。

　　7）将两个培养瓶（皿）补足*培养基到正常体积（果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，为5mL*培养液）

　　8）镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁，悬浮在溶液中，呈圆形。一般2h之内会贴壁，如果已经贴壁，根据细胞类型有不同的形态，但通常都不是圆形。

　　9）镜下观察无误之后，再放入细胞培养箱。培养瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。

　　10）传代之后，第二天细胞换液一次。当然，也可以视情况而定。