欢迎来到上海安为生物科技有限公司网站!
咨询热线

18516249105

当前位置:首页  >  技术文章  >  关于人胚肾细胞293T的培养步骤说明

关于人胚肾细胞293T的培养步骤说明

发表时间:2022-08-29  |  点击率:590
  人胚肾细胞293T是293细胞株插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生细胞株。
  人胚肾细胞293T的培养步骤:
  1)培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液;
  2)无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次(按培养体积加入);
  3)加入适量胰酶消化适当时间(一般胰酶为0.25%;9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑,一般如果是细胞株,非原代培养,消化1-2分钟足矣);
  4)用枪头吹打数十次(视细胞类型而定。一般细胞株30-50次吧,耗时一般2分钟左右);
  5)加入适量体积完全培养基终止胰酶消化(如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,可以加入1mL完全培养基;现在培养瓶(皿)里有2mL溶液)。
  6)现在可以将溶液进行分瓶(2mL)。如果是细胞株,直接均分到两个培养瓶(皿)里。如果是原代培养,可以根据消化时间来对细胞进行分离;因此可以将溶液(2mL)都转入新的培养瓶(皿)。
  7)将两个培养瓶(皿)补足完全培养基到正常体积(果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,为5mL完全培养液)
  8)镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁,悬浮在溶液中,呈圆形。一般2h之内会贴壁,如果已经贴壁,根据细胞类型有不同的形态,但通常都不是圆形。
  9)镜下观察无误之后,再放入细胞培养箱。培养瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。
  10)传代之后,第二天细胞换液一次。当然,也可以视情况而定。
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站