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小鼠原代星形胶质细胞的特性及处理方法

发表时间:2022-01-21  |  点击率:1575
  小鼠原代星形胶质细胞是胶质细胞中体积大的一种。用经典的金属浸镀技术(银染色)显示此类胶质细胞呈星形,从胞体发出许多长而分支的突起,伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间,起支持和分隔神经细胞的作用。
  纤维性星形胶质细胞多分布在脑脊髓的皮质,突起细长,分支较少,胞质中含,多分布在灰质,细胞突起粗短,分支多。胞质内胶质丝较少,又称苔状细胞。电镜下星形胶质细胞的胞核有缺失,胞质较清亮,游离核糖核蛋白体和粗面内质网均很少,糖原颗粒丰富,有大量的胶质丝。纤维形星形胶质细胞的突起呈长圆柱形,而原浆性星形胶质细胞的突起呈薄片状,并常包裹着神经细胞及其突触。星形胶质细胞的脚板与血管内皮细胞之间相隔一层基板,脚板质膜与基板接触处有半桥粒结构。
  小鼠原代星形胶质细胞的特性:
  1、组织来源于实验动物的正常脑组织。
  2、细胞鉴定:神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法。
  3、经鉴定细胞纯度高于90%。
  4、不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
  5、细胞生长方式:星状细胞,贴壁培养。
  细胞处理:
  1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
  2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
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