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小鼠小胶质BV2的培养步骤介绍

发表时间:2022-03-28  |  点击率:1539
  小鼠小胶质BV2“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增Chemicalbook殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力较好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
  小鼠小胶质BV2的培养步骤介绍:
  1、培养基及培养冻存条件准备:
  1)准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%。
  2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度。
  3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
  2、细胞处理:
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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