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人单核细胞白血病细胞THP-1

人单核细胞白血病细胞THP-1

简要描述:
人单核细胞白血病细胞THP-1 STR鉴定
从 1978 年复发的急性单核细胞白血病 (AML) 的 1 岁男孩的外周血中建立。该细胞可以吞噬乳汁珠和激活的红细胞,无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

更新时间:2021-11-29

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产品型号:AW-hum-308

厂商性质:生产厂家

品牌其他品牌应用领域医疗卫生,生物产业

人单核细胞白血病细胞THP-1 STR鉴定

人单核细胞白血病细胞THP-1    

【THP1; O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1】

l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

从 1978 年复发的急性单核细胞白血病 (AML) 的 1 岁男孩的外周血中建立。该细胞可以吞噬乳汁珠和激活的红细胞,无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

注意:NRAS 突变在 PubMed= 9379676 中被错误地指示为p.Gly12Ser。

l 细胞特性

 

1) 来源:急性单核细胞白血病,单核细胞

2) 形态:单核细胞,悬浮

3) 含量:>1x106 细胞数

4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用

l 培养条件

1) 准备RPMI-1640(推荐awcell-0002)培养基;优质胎牛血清,10%;0.05 mM β-qiu基乙醇(细胞培养级 推荐:awcell-8211);双抗,1%。

2) 参考传代比例:传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3) 参考换液频率:传代时换液。

4) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

5) 冻存液:完全培养液95%,DMSO 5%(使用该冻存液后,按照我库的经验复苏存活率约50%,复苏后需要额外培养7-10天才能恢复生长)

l 注意事项

 

【注意事项】:

该细胞为悬浮细胞,根据培养经验以及客户的反馈,传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利,因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

1. 您在收到我们提供的用15ml离心管发货的细胞后,请不要通过离心的方式收集细胞,可以先准备两个新的T25培养瓶,然后将细胞混合均匀后移入两个新的T25培养瓶中,补加培养基到10ml。放入到37℃培养箱中。

2. 您在收到的是用T25培养瓶发货的细胞,请先通过离心的方式收集细胞,然后将细胞重悬加入12ml按照说明书要求配置的完全培养基吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中培养即可。

3. thp-1悬浮细胞。该细胞在培养时更喜欢温和处理,培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换,建议您使用【半换液法】进行传代,添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度即可。

4. 细胞对血清质量较为敏感,我库建议您使用进口品牌优质血清进行培养。FBS不要灭活,如果细胞生长缓慢请尝试使用其他FBS或暂时将FBS浓度增加到20%

5.该细胞的培养液中需添加β-qiu基乙醇(细胞培养级别),若不添加,可能会对细胞状态造成影响。

β-qiu基乙醇的稳定性有限,不可将β-qiu基乙醇添加到完全培养基中长期储存,在每次传代或液体添加时再添加β-巯基乙醇。

β-qiu基乙醇(2-qiu基乙醇)被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中,因为在培养基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不应求,而胱氨酸则很多。有些细胞(例如T细胞)无法将半胱氨酸转运到细胞质中,必须将其转化为半胱氨酸。β-qiu基乙醇将胱氨酸还原为可被细胞转运的形式,然后转化为细胞生长所需的半胱氨酸。  β-qiu基乙醇还是一种还原剂,可以分解培养中细胞产生的许多有毒代谢产物,从而改善细胞周围的环境。

6.该细胞对细胞密度较为敏感,培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围(具体请参考细胞说明书)。

7..该细胞冻存后复苏率较低,冻存时请酌情提高细胞量

8.通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完全培养基来维持细胞的生长,每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中,来完成细胞的全换液。

ATCC有关thp-1细胞保持细胞活力的说明

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(频繁的细胞计数是监测thp-1的最佳方法。这些细胞应该每2至3天通过向烧瓶中简单加入少量新鲜培养基(使它们具有条件培养基)来培养。您不需要每次都离心细胞并重新传代。当在我们的实验室中培养时,到第2天,细胞通常可以扩增到具有更多培养基的更大的烧瓶中。当细胞密度达到8×10 5个活细胞/ ml时需要进行传代。不允许细胞密度超过1×10(6)活细胞/ ml。)

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4)运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

l 运输形式

低温:(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

常温: (2) T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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