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品牌 | 安为 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
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MCF-10A 人乳腺上皮细胞
【MCF10A; MCF-10 Attached; Michigan Cancer Foundation-10A】 | |
l 细胞鉴定 | STR鉴定已通过 |
l 细胞来源 | 国家资源库 |
l 细胞背景 | 来源于一位36碎白人女性,MCF 10A 来源于群体中的贴壁细胞。MCF 10A 细胞系是一种非致瘤性上皮细胞系。细胞上皮唾液黏蛋白、细胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈阳性。它们在胶原蛋白中表现出三维生长,并在融合培养物中形成圆顶。到目前为止,细胞没有显示出终末分化或衰老的迹象。该线对胰岛素、糖皮质激素、霍乱肠毒素和表皮生长因子 (EGF) 有反应。通过电子显微镜,细胞显示管腔导管细胞的特征,但不显示肌上皮细胞的特征。它们还表达通过与 MFA-Breast 和 MC-5 单克隆抗体的阳性反应检测到的乳腺特异性抗原。培养基中的钙含量对细胞的形态有很强的影响。 |
l 培养条件: | 1)准备MEGM kit培养基 (Lonza/Clonetics,CC-3150)备注:培养基包含(A+B) A : MEBM基础培养液 (货号CC-3151) B: 细胞生长添加剂 5管 (货号CC-4136) 5管 1) CC-4009G BPE 2.0ml 2) CC-4017G hEGF 0.5ml 3) CC-4021G INSULIN 0.5ml 4) CC-4031G HYDROCORTISONE 0.5ml 5) CC-4081G GA-1000 0.5ml C: 霍乱毒素(cholera toxin)(awcell-8070) (100ng/ml) 500 ul D: P/S青霉素-链霉素 (awcell-15140-122) 5 ml 2) 培养条件: 气相:空气,100%; 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
l 注意事项:
| 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 4)运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 |
l 运输形式: | 低温:(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。 常温(2) T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 |
l 生物安全 | 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。 |
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