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应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
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小鼠胚胎成纤维细胞MEF 种属鉴定 安为生物
小鼠胚胎成纤维细胞MEF MEF【MEF】 | |
l 细胞鉴定 | 种属鉴定已通过 |
l 细胞来源 | 国家资源库 |
l 细胞背景 | 取孕9天的615小鼠胚胎,去除脑、心脏等培养建立。该细胞可用作饲养层细胞,支持胚胎干细胞ES的生长并维持ES未分化的状态。当作为饲养层细胞时,MEF需经丝裂mei素C处理停止生长。建议作为ES细胞的饲养层时,MEF不要超过6代。 |
l 细胞特性
| 1) 来源:小鼠胚胎 2) 形态:成纤维细胞样,贴壁生长 3) 含量:>1x106 细胞数 4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装 5) 用途:仅供科研使用 |
l 培养条件 | 1) 准备D/F12(推荐awcell-0005)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 |
l 注意事项
| 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法: 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 |
l 运输形式 | 低温:(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。 常温: (2) T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 |
l 生物安全 | 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。 |
在进行ESC或iPSC的实验时,使用MEF作为饲养层是至关重要的,因为它们能够分泌一些细胞因子,如肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子β(TGF-β),这些因子有助于抑制干细胞的分化。此外,MEF细胞在培养过程中经过灭活处理,确保它们不会增殖并干扰干细胞的生长。
选择高质量的MEF细胞对于实验的成功至关重要。好的MEF细胞应具备以下特点:生长停滞,确保细胞已经过灭活处理;具有高复苏率,通常大于80%;以及对ESC/iPSC具有强大的支持能力,这可以通过观察干细胞形态和检测ALP表达水平来评估。
OriCell®是提供高质量MEF细胞的供应商之一,他们的产品经过预灭活处理,确保了高复苏率和对ESC/iPSC的良好支撑能力。此外,OriCell®还提供专门针对MEF细胞优化的培养基,以保证细胞的高复苏和贴壁效率。
值得注意的是,尽管MEF细胞在干细胞研究中非常有用,但它们也可能带来一些挑战,例如细胞老化和污染的风险。因此,研究人员需要仔细选择和处理这些细胞,以确保实验的准确性和可靠性。
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