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人肾皮质近曲小管上皮细胞   HK-2

人肾皮质近曲小管上皮细胞 HK-2

简要描述:
HK-2(人类肾脏 2)是一种源自正常肾脏的近端肾小管细胞 (PTC) 系。通过用人乳头瘤病毒 16 (HPV-16) E6/E7 基因转导使细胞永生化。
1) 来源:肾皮质/近端小管
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。

更新时间:2021-09-06

访问量:418

产品型号:HK2

厂商性质:生产厂家

品牌其他品牌应用领域医疗卫生,生物产业

     HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞   

 

HK-2HK2

细胞鉴定

STR鉴定已通过

细胞来源

国家资源库

细胞背景

HK-2(人类肾脏 2)是一种源自正常肾脏的近端肾小管细胞 (PTC) 系。通过用人乳头瘤病毒 16 (HPV-16) E6/E7 基因转导使细胞永生化。根据Southern FISH 分析,该细胞系似乎源自单个细胞。人肾近曲小管细胞HK-2含有HPV-16 E6/E7基因的重组逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7。尽管pLXSN 16 E6/E7对新霉素有抗性,但不能用G418分离转导的克隆。该细胞系基于SouthernFISH分析可分离成单个细胞。通过PCR测定,E6/E7基因存在于HK-2基因组中。细胞保留分化良好的PTCs表型。碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶、亮氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、细胞角蛋白、α3、β1整联蛋白和纤连蛋白表达阳性。VIII因子相关抗原、6.19抗原和CALLA内肽酶表达为阴性。HK-2细胞保留着近端肾小管上皮细胞的功能特征,例如Na+依赖性/根皮苷敏感性糖转运和腺苷酸环化酶对甲状旁腺有响应,但对抗利尿激素不敏感。该细胞具有生成和储存糖原的能力来证明。HK-2细胞贴壁生长,在甲基纤维素,软琼脂上不生长且不能悬浮生长。每个批次均通过本库支原体检测,结果为阴性。

细胞特性

 

1) 来源:肾皮质/近端小管

2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长

3) 含量:>1x106  细胞数

4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用。

培养条件

1)准备 角质细胞无血清培养基 (推荐:awcell-0019培养基,包含两个组份:基础培养基1+生长因子1管)或者 Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) ,添加对应因子,1% P/S 来培养细胞。

备注:Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培养液包含两个组份:基础培养基1瓶(货号10785-012+生长因子1( 货号10784-015

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%

注意事项:

 

备注:

1. 该细胞贴壁较慢,为使细胞贴壁更容易,建议可提前在培养皿/培养瓶中铺0.25%的明胶溶液,并于贴壁24~48小时后再进行后续操作。

2. 该细胞生长不能过密,请在生长密度80%时进行传代。

3.使用0.05%胰酶消化细胞,由于Defined K-SFM为无血清培养液无法终止胰酶消化,所以消化完成后要通过离心(建议125xg离心510分钟)去除胰酶或者用带10%血清的培养基来终止消化,再进行后续操作。

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4)运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶12传代 。

运输形式

低温:11mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系

常温2 T25瓶复苏的存活细胞常温发货,到后按照细胞接收后的处理方法操作。

生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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