人肾皮质近曲小管上皮细胞 HK-2

l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

HK-2（人类肾脏 2）是一种源自正常肾脏的近端肾小管细胞 (PTC) 系。通过用人乳头瘤病毒 16 (HPV-16) E6/E7 基因转导使细胞永生化。根据Southern 和FISH 分析，该细胞系似乎源自单个细胞。人肾近曲小管细胞HK-2含有HPV-16 E6/E7基因的重组逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7。尽管pLXSN 16 E6/E7对新霉素有抗性，但不能用G418分离转导的克隆。该细胞系基于Southern和FISH分析可分离成单个细胞。通过PCR测定，E6/E7基因存在于HK-2基因组中。细胞保留分化良好的PTCs表型。碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶、亮氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、细胞角蛋白、α3、β1整联蛋白和纤连蛋白表达阳性。VIII因子相关抗原、6.19抗原和CALLA内肽酶表达为阴性。HK-2细胞保留着近端肾小管上皮细胞的功能特征，例如Na+依赖性/根皮苷敏感性糖转运和腺苷酸环化酶对甲状旁腺有响应，但对抗利尿激素不敏感。该细胞具有生成和储存糖原的能力来证明。HK-2细胞贴壁生长，在甲基纤维素，软琼脂上不生长且不能悬浮生长。每个批次均通过本库支原体检测，结果为阴性。

l 细胞特性

1） 来源：肾皮质/近端小管

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

l 培养条件：

1）准备 角质细胞无血清培养基 (推荐：awcell-0019培养基，包含两个组份：基础培养基1瓶+生长因子1管）或者 Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) ，添加对应因子，1% P/S 来培养细胞。

备注:Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培养液包含两个组份：基础培养基1瓶（货号10785-012）+生长因子1管( 货号10784-015）

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

备注：

1. 该细胞贴壁较慢，为使细胞贴壁更容易，建议可提前在培养皿/培养瓶中铺0.25%的明胶溶液，并于贴壁24~48小时后再进行后续操作。

2. 该细胞生长不能过密，请在生长密度80%时进行传代。

3.使用0.05%胰酶消化细胞，由于Defined K-SFM为无血清培养液无法终止胰酶消化，所以消化完成后要通过离心（建议125xg离心5到10分钟）去除胰酶或者用带10%血清的培养基来终止消化，再进行后续操作。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。