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品牌 | 安为 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
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MCF-7 人乳腺癌细胞
MCF-7【MCF7】 | |
l 细胞鉴定 | STR鉴定已通过 |
l 细胞来源 | 国家资源库 |
l 细胞背景 | 该细胞是1970从一名69岁的白人女性转移性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性,包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构(domes);该细胞表达WNT7B癌基因;TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长;抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。 |
l 培养条件: | 1) 准备MEM(推荐awcell-0012)培养基;优质胎牛血清,10%;添加0.01mg/ml 胰岛素;双抗1%。2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
l 注意事项:
| 注意事项: a. mcf-7 细胞一般情况下是生长缓慢的细胞系,前期呈岛状生长,随着细胞生长,细胞会逐步变成扁平单层细胞。通常需要6-12天才能达到80%生长密度,如果生长速度比正常情况还要缓慢,可能需要换另外批次的血清,把血清浓度提高到20%也有助于改善细胞生长情况。 b. mcf-7细胞在复苏和传代后,会在培养基中观察到成团的细胞漂浮物,对于这个细胞来说这是正常的情况,在复苏和传代后前三天可以静置细胞不做处理,三天后贴壁情况会有所改善,但悬浮的细胞团仍会出现,这些悬浮的细胞是活细胞在换液和传代时需要离心回收,这些悬浮细胞团可以通过使用移液器(5mL或者更小)来吹散,重新打入到贴壁细胞培养瓶中。丢弃这些悬浮细胞会使细胞密度变低,细胞生长缓慢。 c. 使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化细胞。 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 4)运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 |
l 运输形式: | 低温:(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。 常温(2) T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 |
l 生物安全 | 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。 |
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