小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞 Beta-TC-6

l 细胞鉴定

种属鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

这株细胞来源于转基因小鼠中生长的一个胰腺肿瘤(胰岛素瘤)。 这种小鼠携带了大鼠胰岛素II基因启动子调控的SV40早期基因的假基因结构。 细胞包含丰富的胰岛素和小量的胰高血糖素及生长抑素。响应葡萄糖而分泌胰岛素[PubMed:7533732]。

l 细胞特性

1） 来源：胰岛素瘤

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长，少量悬浮。

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

l 培养条件：

1） 准备DMEM(含1.5g/L NaHCO3，推荐：awcell-128-0001或者(GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)  ）培养基；优质胎牛血清，15%；双抗1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

注意事项：

1. Beta-TC-6细胞生长缓慢，这些细胞从冷冻保存中恢复需要几天的时间。开始时通常具有少量可存活的漂浮细胞，其最终会形成簇并粘附在培养瓶底部，它们成簇地连接并形成堆积细胞的岛屿。细胞不会*融合，培养物上会粘附可存活的漂浮细胞，可通过温和离心保留。在添加细胞前，培养基至少要提前15-30分钟平衡温度和PH。

2. 该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。

该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全:

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。